卫计委健康管理师考试辅导：维生素D的测定方法2

5.2测定液的制备：

1） 于上述样品溶液中加入100mL的20％没食子酸乙醇溶液，充分混匀后加50mL75％氢氧化钾溶液，在蒸汽浴上边续回流30min后，立刻冷却到室温。

2） 将皂化液转入一500mL分液漏斗中，用100mL水分几次冲平底烧瓶。洗涤液并入分液漏斗中。

3） 于上述分液漏斗中，加入100mL石油醚，盖好瓶塞，倒置分液漏斗并剧烈振摇1 min.在振摇过程中，注意释放瓶内压力。静置分层，将水相放入另一500mL分液漏斗中，重复上棕萃取过程2次，合并醚液到第一个分液漏斗中。用蒸馏水洗该醚液至中性，通过无水硫酸钠过滤干燥，在40℃和氮气流下，于旋转蒸发器上蒸至近于（绝不允许蒸干）后，用石油醚转移至10mL容量瓶中，定容。

4） 从上述容量瓶中取7mL放入一试管中，用氮气将石油醚吹干，于试管中加1mL正己烷。

5.3测定：

1） 测定液的制备：

A） 仪器条件：

色谱柱：30cm×40cm，硅胶柱。

流动相：正己烷与环己烷按体积比1：1混合，并按体积分数0.8％加入异丙醇。

流速：1mL/min。

波长：265nm。

柱温：20℃。

灵敏度：0.005AU/MV。

注射体积：200mL。

B） 注射50mL维生素D标样和200mL样品溶液，根据维生素D标样保留时间收集维生素D于试管中，将试管用氮气吹干，准确加入0.2mL甲醇溶解。

2） 测定步骤：

A） 仪器条件：

色谱柱：4.6mm×25cm，C18或具同等性能的色谱柱。

流动相：甲醇。

流速：1mL/min。

波长：265nm。

柱温：20℃。

灵敏度：0.005AU/MV。

注射体积：50mL。

B） 注射50mL维生素D标准溶液，注射50mL样品溶液，得到标样和样品溶液中维生素D峰面积或峰高。

6. 计算

ρs×10∕7×40×100

X =

m

As

ρs= ---×ρsd

Asd

式中： X--样品维生素D的量，mg/100g；

m--称样量，含量，IU∕100g；

ρs --进样液中维生素D有浓度，mg/mL；

A s --进样液中维生素D有峰高（或峰面积）；

A s d --标样液中维生素D有峰高（或峰面积）；

ρsd --标样中维生素D的浓度；

计算结果精确至小数点后一位。

7. 注意事项

1） 允许误差及最小检出量：同一样品的2次测定值之差不得超过2次测定平均值的10％；最小检出量为0.1国标单位。

2） 试剂焦性没食子酸容易变性，应购习近期生产的试剂。

3） 如果皂化不完全，可适当增加氢氧化钾的加入量。